The quality of platelet concentrate suspended in SSP+ and cold stored for 5 days

Cover Page

Cite item

Full Text

Abstract

Introduction. The cold storage of platelets at 2–6°C has a number of advantages such as bacterial growth reduction and metabolic slowdown, and may be an alternative to conventional storage at room temperature. However, the impact of cold storage on platelet function continues to cause controversy among specialists.

Aim: to compare the functional parameters of platelet concentrates suspended in SSP+ additive solution when stored for 5 days under standard conditions versus in the refrigerator.

Materials and methods. To assess the function of stored platelets, flow cytometry and platelet aggregation analysis using the low-angle light scattering technique were employed.

Results. It was shown that the number and morphological parameters of the cold-stored platelets had not changed during the 5-day period and remained within the reference range. At the same time, spontaneous expression of P-selectin and phosphatidylserine, platelet activation markers, increased significantly, compared to standard storage conditions. When refrigerated, platelets responded better to collagen activation and their aggregation capacity also remained high. There were no significant differences in platelet desialylation between Days 1 and 5 of cold storage.

Conclusion. The obtained results allow us to conclude that platelets retain their activation and aggregation capacity when stored in the cold within the standard 5-day shelf life.

Full Text

Концентраты тромбоцитов (КТ) играют ключевую роль в современной трансфузиологии, обеспечивая эффективную профилактику и лечение кровотечений у пациентов. Возможность хранения тромбоцитов для переливания с сохранением их гемостатической активности является ключевым аспектом для банков крови и трансфузионной медицины. Традиционно КТ хранят при комнатной температуре (20–24°C) (К-КТ) с постоянным перемешиванием не более 5 дней, чтобы сохранить их жизнеспособность и функциональность. Хранение КТ в холодильнике при температуре 2–6°C (Х-КТ) имеет ряд потенциальных преимуществ [1, 2]. Риск размножения бактерий является основным фактором, ограничивающим К-КТ, а Х-КТ препятствует росту бактерий [2]. Также Х-КТ приводит к снижению скорости метаболических процессов [3], что открывает возможности для увеличения сроков годности КТ [4].

В то же время известно, что КТ холодового хранения характеризуются коротким периодом циркуляции тромбоцитов после переливания (1–2 дня) [5]. При температуре ниже 15°С в тромбоцитах начинается процесс десиалирования – утрата сиаловых кислот с поверхности тромбоцитов. На внешней мембране тромбоцитов обнажаются остатки b-галактозы, которые распознаются рецепторами Эшвелла–Морелла, в результате чего тромбоциты удаляются из кровотока гепатоцитами [6]. Также охлаждение вызывает образование кластеров гликопротеина GPIba на поверхности тромбоцитов [7], что опосредует фагоцитоз макрофагами [8]. Несмотря на ускоренный клиренс, результаты исследований показывают, что КТ холодового хранения могут обладать более высокой гемостатической эффективностью у пациентов с острым кровотечением [9, 10]. Недавние данные также подтверждают безопасность и целесообразность переливания охлажденных тромбоцитов пациентам с кровотечением [11, 12].

В последние годы внедрение добавочных растворов для хранения тромбоцитов открывает перспективы для улучшения их качества и срока годности при хранении в холоде. Разведение КТ добавочным раствором уменьшает количество плазмы, а следовательно, и содержащегося в ней фибриногена, что минимизирует слипание тромбоцитов при хранении [9]. Недавние сравнительные исследования характеристик КТ, заготовленных в плазме и в добавочном растворе, показали, что в последнем лучше сохраняются ключевые метаболические, фенотипические и функциональные параметры тромбоцитов при хранении в холоде [13–15]. Однако разнообразие используемых добавочных растворов и способов заготовки КТ, а также дизайнов исследований затрудняет применение этих данных.

В данном исследовании мы сравнили КТ, заготовленные в добавочном растворе SSP+, по таким параметрам, как степень спонтанной активации, ответ на стимуляцию коллагеном, а также уровень десиалирования при К-КТ и Х-КТ в течение 5 дней.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Заготовка концентратов тромбоцитов

В исследовании участвовали здоровые доноры (n = 3), которые прошли рутинное обследование и дали согласие на проведение процедуры автоматического афереза.

КТ (n = 3) заготавливали методом афереза на аппарате Trima Accel (Caridian BCT, США), версия 7. Добавление плазмозамещающего раствора SSP+ (MacoPharma, Франция) производилось автоматически в соотношении плазма/SSP+, равном 40/60. Все заготовленные КТ прошли лейкоредукцию, содержание лейкоцитов было менее 1 × 106.

КТ находились вне шейкера при комнатной температуре в течение 1–2 ч после получения, а затем разделялись на 2 одинаковых образца. Оба образца подвергались воздействию ионизирующим излучением в дозе 25 Гр. Один образец хранили в стандартных условиях в термостате (20–24°C) при постоянном перемешивании (К-КТ). Другой образец помещали в холодильную камеру (2–6°C) и хранили без перемешивания (Х-КТ). Отбор проб КТ для исследований проводили на 1-й и 5-й дни после заготовки. Для образцов Х-КТ перед отбором проб проводили мягкое перемешивание для разрушения видимых агрегатов.

Исследование концентратов тромбоцитов

Количество тромбоцитов и их морфологические характеристики определяли с помощью гематологического анализатора Sysmex KX-21 (Sysmex Corporation, Япония).

Исследование агрегации тромбоцитов методом малоуглового светорассеяния проводили в соответствии с протоколом, описанным ранее [16]. КТ разбавляли до 20 000 тромбоцитов/мкл буфером А, содержащим 140 мМ NaCl, 10 мМ HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота), 2 мМ KCl, 1 мМ MgCl2, 5 мМ глюкозы, pH 7,4 (все реагенты производства Sigma-Aldrich, США). Для активации тромбоцитов использовали коллаген (Технология Стандарт, Россия) в концентрации 0,4 мг/мл. Перед измерением в кювету также добавляли 200 мкг/мл фибриногена и 2 мМ CaCl2. Исследования агрегации проводились на лазерном анализаторе частиц ЛАСКА (БиоМедСистем, Санкт-Петербург) при температуре в кювете 23°С и перемешивании 1200 об/мин. Оценивали амплитуду светорассеяния А на 1,5°, как описано в работе G.S. Svidelskaya и соавт. [16].

Для исследования экспрессии Р-селектина и фосфатидилсерина на поверхности тромбоцитов методом проточной цитометрии образцы КТ разбавляли в 40 раз буфером Б (150 мМ NaCl, 2,7 мМ KCl, 1 мМ MgCl2, 20 мМ HEPES, 5 мМ глюкозы, 0,5% бычий сывороточный альбумин, pH 7,4). Интактные тромбоциты инкубировали с антителами к Р-селектину CD62P, мечеными аллофикоцианином CD62P-АФЦ (BD Biosciences, США) и с конъюгатом аннексина V с зеленым флуоресцентным белком (аннексин V-GFP; произведен в НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева) в присутствии 2,5 мМ CaCl2 в течение 10 мин при 37°С. Затем пробы разбавляли буфером Б c 2,5 мМ CaCl2 в 10 раз и измеряли на проточном цитометре Novocyte 3000 (ACEA Biosciences, Inc., США). Оценивали среднюю интенсивность флуоресценции связавшихся с тромбоцитами антител CD62P-АФЦ и процент аннексин V-положительных тромбоцитов.

Для исследования активации тромбоцитов использовали фибриллярный коллаген человека I типа (Имтек, Россия) в концентрации 100 мкг/мл. В пробы без активации вместо коллагена добавляли буфер. Тромбоциты инкубировали с коллагеном в течение 10 мин при 37°С, после чего в пробы добавляли антитела CD62P-АФЦ и инкубировали еще 10 мин. Затем пробы разбавляли буфером Б в 10 раз и измеряли на проточном цитометре Novocyte 3000. Оценивали среднюю интенсивность флуоресценции связавшихся с тромбоцитами антител.

Для исследования статуса десиалирования тромбоцитов использовали лектин RCA I (ricinis communis agglutinin I), меченый красителем AF647 (Люмипроб, Россия), лектин SNA из Sambucus nigra, меченый красителем FITC, и лектин MAL II из Maackia amurensis, меченый красителем AF647. Все лектины производства Vector Laboratories (США). Тромбоциты отмывали центрифугированием, для этого к 600 мкл КТ добавляли 300 мкл цитрата натрия (106 мМ, рН 5,5) и центрифугировали при 400g 5 мин. Затем удаляли супернатант и ресуспендировали тромбоциты в 600 мкл буфера А. Суспензию тромбоцитов разбавляли до 3000 тромбоцитов/мкл и инкубировали с 1 мкг/мл лектина SNA, меченого красителем FITC, или 8 мкг/мл лектина RCA I, меченого красителем AF647, или 10 мкг/мл лектина MAL II, меченого красителем AF647 в течение 30 мин при 37°С. Затем пробы разбавляли буфером А в 10 раз и измеряли на проточном цитометре Novocyte 3000. Оценивали среднюю интенсивность флуоресценции лектинов, связавшихся с тромбоцитами.

Статистический анализ

Данные представлены в виде среднего значения ± стандартное отклонение (M ± SD). Для попарного сравнения использовали критерий Стьюдента, различия считали статистически значимыми при p < 0,05. Результаты обработаны с использованием программного обеспечения OriginPro, версия 8.0 (OriginLab Corporation, США).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Среднее содержание тромбоцитов в 1-й день хранения не отличалось для пар образцов К-КТ и Х-КТ и достоверно не изменялось от 1-го к 5-му дню хранения (рисунок 1А). Средний объем тромбоцитов (MPV) и показатель распределения тромбоцитов по объему (PDW) были на 10–15% выше для Х-КТ по сравнению с К-КТ уже в 1-й день хранения, и это соотношение сохранялось на 5-й день (рисунок 1Б, В). При этом внутри групп К-КТ и Х-КТ показатели MPV и PDW достоверно не изменялись от 1-го к 5-му дню хранения и оставались в пределах референсных значений.

 

Рисунок 1. Морфологические параметры тромбоцитов в 1-й и 5-й дни хранения: А – количество тромбоцитов; Б – MPV; В – PDW

* – достоверные отличия между К-КТ и Х-КТ в пределах 1 дня хранения, p < 0,05

Figure 1. Platelet morphological parameters on Days 1 and 5 of storage: А – platelet count; Б – mean platelet volume (MPV); В – platelet distribution width (PDW)

* – significant differences between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05. RSPs – room temperature-stored platelets (at 20–24°C); CSPs – cold-stored platelets (at 2–6°C)

 

Методом проточной цитометрии показано, что Х-КТ приводит к более выраженной спонтанной активации тромбоцитов по сравнению с К-КТ, на что указывает увеличение экспрессии Р-селектина и аннексина V (маркер фосфатидилсерина) на поверхности интактных тромбоцитов (рисунок 2). Достоверные отличия по этим параметрам между К-КТ и Х-КТ наблюдались уже в 1-й день хранения и возрастали к 5-му дню.

 

Рисунок 2. Спонтанная активация тромбоцитов при К-КТ и Х-КТ, измеренная методом проточной цитометрии с использованием антитела CD62P-АФЦ к Р-селектину (А) и аннексина V-GFP (Б)

* – достоверное отличие между К-КТ и Х-КТ в пределах 1 дня хранения, p < 0,05; § – достоверное отличие для К-КТ между 1-м и 5-м днями хранения, p < 0,05; # – достоверное отличие для Х-КТ между 1-м и 5-м днями хранения, p < 0,05

Figure 2. Spontaneous activation of RSPs and CSPs measured by flow cytometry using the CD62P-APC antibody to P-selectin (А), and annexin-V-GFP (Б)

* – a significant difference between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05; § – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for RSPs, p < 0.05; # – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for CSPs, p < 0.05

 

При стимуляции коллагеном человека I типа для Х-КТ выявлена более высокая (в 1,7 раза) степень активации тромбоцитов (по экспрессии Р-селектина) по сравнению с К-КТ как в 1-й, так и на 5-й день хранения (рисунок 3А), причем при вычитании уровня спонтанной активации повышенный уровень активации Х-КТ сохраняется (рисунок 3Б).

 

Рисунок 3. Изменение функциональных свойств тромбоцитов при К-КТ и Х-КТ: А – экспрессия Р-селектина для тромбоцитов, активированных коллагеном человека I типа; Б – экспресcия Р-селектина для тромбоцитов, активированных коллагеном человека I типа, после вычитания уровня спонтанной активации; В – амплитуда агрегации тромбоцитов с коллагеном, измеренная на анализаторе ЛАСКА

* – достоверное отличие между К-КТ и Х-КТ в пределах 1 дня хранения, p < 0,05; § – достоверное отличие для К-КТ между 1-м и 5-м днями хранения, p < 0,05; # – достоверное отличие для Х-КТ между 1-м и 5-м днями хранения, p < 0,05

Figure 3. Changes in the functional parameters of RSPs and CSPs: А – P-selectin expression in platelets activated by human collagen type I; Б – P-selectin expression in platelets activated by human collagen type I after the subtraction of spontaneous activation; В – the amplitude of collagen-induced platelet aggregation measured with the LaSca analyzer

* – a significant difference between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05; § – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for RSPs, p < 0.05; # – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for CSPs, p < 0.05

 

Исследование агрегационной способности тромбоцитов проводили методом малоуглового светорассеяния на анализаторе ЛАСКА. Данный метод основан на измерении рассеяния лазерного луча, проходящего через кювету с суспензией тромбоцитов, и позволяет анализировать образование агрегатов тромбоцитов при концентрациях порядка 104/мкл в стандартизованном буферном растворе с физиологической концентрацией ионов кальция [17]. Обнаружено, что при активации тромбоцитов коллагеном амплитуда агрегации для Х-КТ в 1-й день хранения была достоверно ниже по сравнению с К-КТ, это отличие не превышало 15% и сохранялось на 5-й день хранения (рисунок 3В). К 5-му дню хранения амплитуда агрегации с коллагеном как для Х-КТ, так и для К-КТ была снижена на 15–20% по сравнению с 1-м днем.

Для изучения статуса десиалирования (процесс отщепления сиаловых кислот) тромбоцитов мы использовали флуоресцентно меченые лектины, которые специфически связываются с определенными углеводами на поверхности тромбоцитов. Лектин SNA связывается с a-2,6-сиаловыми кислотами, связанными с N-ацетилгалактозамином или галактозой, лектин MAL II – с сиаловыми кислотами с a-2,3-связью, а лектин RCA I – с остатками b-галактозы, которые становятся доступны при десиалировании тромбоцитов (рисунок 4). Использование этих 3 лектинов позволяет оценить изменения в содержании сиаловых кислот разного типа на поверхности тромбоцитов. В 1-й день хранения не было выявлено достоверных отличий между К-КТ и Х-КТ по связыванию лектинов SNA, MAL II и RCA I. На 5-й день хранения для К-КТ наблюдали снижение связывания на 10–15% всех 3 лектинов по сравнению с 1-м днем хранения, для MAL II и RCA I эти отличия были достоверными. При этом для Х-КТ не было обнаружено отличий в связывании лектинов между 1-м и 5-м днями хранения.

 

Рисунок 4. Десиалирование тромбоцитов при К-КТ и Х-КТ. Средняя интенсивность флуоресценции связавшихся с тромбоцитами лектинов: А – SNA, меченого красителем FITC; Б – MAL II, меченого красителем AF647; В – RCA I, меченого красителем AF647

* – достоверное отличие между К-КТ и Х-КТ в пределах 1 дня хранения, p < 0,05; § – достоверное отличие для К-КТ между 1-м и 5-м днями хранения, p < 0,05

Figure 4. RSP and CSP desialylation. The mean fluorescence intensity of lectins bound to platelets: А – FITC–labeled SNA; Б – AF647-labeled MAL II; В – AF647-labeled RCA I

* – a significant difference between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05; § – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for RSPs, p < 0.05

 

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

В этом исследовании мы сравнили морфологические и функциональные характеристики КТ, заготовленных в добавочном растворе SSP+, при Х-КТ и К-КТ.

Хранение в холоде вызывало характерные изменения в морфологии тромбоцитов, что выражалось в более высоких значениях параметров MPV и PDW для Х-КТ по сравнению с К-КТ. Это может объясняться тем, что под воздействием низкой температуры тромбоциты теряют свою дискоидную форму и становятся неправильной сферической формы с множеством псевдоподий вследствие распада микротрубочек и перестройки актинового цитоскелета [18]. Количество тромбоцитов и их морфологические характеристики при К-КТ и Х-КТ не изменялись в течение 5 дней, что подтверждает результаты, полученные ранее другими авторами [13, 19–21].

Уровни экспрессии P-селектина и фосфатидилсерина в образцах Х-КТ были значительно выше, чем в образцах К-КТ, и в 1-й, и в 5-й дни хранения, что указывает на более «активированное» состояние тромбоцитов при хранении в холоде и согласуется с ранее опубликованными работами [13, 19]. При этом образцы Х-КТ лучше отвечали на стимуляцию коллагеном по экспрессии Р-селектина, хотя амплитуда агрегации тромбоцитов, измеренная на лазерном анализаторе ЛАСКА с коллагеном, была несколько снижена для Х-КТ по сравнению с К-КТ. L. Johnson и соавт. в своей работе [20] использовали классический метод агрегометрии светопропускания и наблюдали сравнимое по величине снижение агрегации тромбоцитов при стимуляции коллагеном к 5-му дню Х-КТ, заготовленных в добавочном растворе SSP+.

Изучение уровня десиалирования показало, что в течение 5 дней холодового хранения в добавочном растворе SSP+ не происходит значимых изменений в углеводном составе поверхности тромбоцитов. В нашем исследовании мы использовали 3 взаимодополняющих лектина, селективных к различным углеводам на поверхности тромбоцитов, и получили по ним согласованные результаты. В опубликованных работах есть данные только по лектину RCA I. Так, I. Marini и соавт. [14] также получили сходную экспрессию b-галактозы для КТ при холодовом и стандартном хранении в течение 7 дней в добавочном растворе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данном экспериментальном исследовании мы показали, что КТ, заготовленные в добавочном растворе SSP+, при холодовом хранении без перемешивания в течение 5 дней сохраняют способность к активации и агрегации, а также углеводный состав мембраны. Это позволяет рассматривать холодовое хранение КТ, заготовленных в SSP+, в качестве альтернативы существующему стандарту хранения КТ.

ВКЛАД АВТОРОВ

А.А. Игнатова: дизайн исследования, проведение исследования, анализ данных, написание черновика рукописи, пересмотр и редактирование рукописи;

Н.Н. Старостин, М.Д. Сысоев: проведение исследования, анализ данных;

Г.С. Свидельская: написание черновика рукописи, проведение исследования, анализ данных, пересмотр и редактирование рукописи;

Е.О. Осидак: пересмотр и редактирование рукописи, руководство исследованием;

П.Е. Трахтман: дизайн исследования, пересмотр и редактирование рукописи, руководство исследованием.

AUTHOR CONTRIBUTIONS

A.A. Ignatova: study design, investigation, formal analysis, writing – original draft, writing – review & editing;

N.N. Starostin, M.D. Sysoev: investigation, formal analysis;

G.S. Svidelskaya: writing – original draft, investigation, formal analysis, writing – review & editing;

E.O. Osidak: writing – review & editing, supervision;

P.E. Trakhtman: study design, writing – review & editing, supervision.

БЛАГОДАРНОСТЬ

Авторы выражают благодарность старшему научному сотруднику ФГБУ «НМИЦ им. В.А. Алмазова» Минздрава России А.В. Соколову за предоставленный для исследования фибриноген, сотруднику лаборатории клеточного гемостаза и тромбоза ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России И.А. Чабину за флуоресцентное мечение лектинов, фонду «Наука – детям» за поддержку данного исследования.

ACKNOWLEDGEMENTS

The authors would like to thank A.V. Sokolov, a senior researcher at the V.A. Almazov National Medical Research Center of Ministry of Healthcare of the Russian Federation, for providing the fibrinogen used in this study; as well as I.A. Chabin, a researcher at the Laboratory of Cellular Hemostasis and Thrombosis at the Dmitry Rogachev National Medical Research Centеr of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation, for fluorescent labeling of the employed lectins. The authors are grateful to the Science for Children Foundation for the support of this study.

ЭТИЧЕСКАЯ ЭКСПЕРТИЗА

Все участники исследования подписали согласие на проведение процедуры автоматического афереза. Исследование было одобрено независимым этическим комитетом ФГБУН Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии Российской академии наук (протокол №2/1-24 от 21.11.2024).

ETHICS REVIEW

All the participants of the study gave their written consent to automated apheresis. The study was approved by the Independent Ethics Committee of the Center for Theoretical Problems of Physical and Chemical Pharmacology of the Russian Academy of Sciences (protocol No. 2/1-24 dated 21.11.2024).

ИСТОЧНИК ФИНАНСИРОВАНИЯ

Работа выполнена при поддержке гранта Российского научного фонда (проект №24-15-00387).

FUNDING

The study was supported by a grant from the Russian Science Foundation (project No. 24-15-00387).

КОНФЛИКТ ИНТЕРЕСОВ

Авторы статьи подтвердили отсутствие конфликта интересов, о котором необходимо сообщить.

CONFLICT OF INTEREST

The authors confirm that there is no conflict of interest to declare.

×

About the authors

A. A. Ignatova

The Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation

Author for correspondence.
Email: anastasiya.ignatova@dgoi.ru
ORCID iD: 0000-0002-5217-3937

Researcher at the Laboratory of Cellular Hemostasis and Thrombosis

Russian Federation, Moscow

N. N. Starostin

The Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation

Email: anastasiya.ignatova@dgoi.ru
ORCID iD: 0000-0002-1219-8654
Russian Federation, Moscow

G. S. Svidelskaya

The Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation; Center for Theoretical Problems of Physical and Chemical Pharmacology of the Russian Academy of Sciences

Email: anastasiya.ignatova@dgoi.ru
ORCID iD: 0000-0001-9744-9629
Russian Federation, Moscow; Moscow

M. D. Sysoev

The Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation

Email: anastasiya.ignatova@dgoi.ru
ORCID iD: 0009-0002-7186-1978
Russian Federation, Moscow

E. O. Osidak

The Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation

Email: anastasiya.ignatova@dgoi.ru
ORCID iD: 0000-0003-2549-4011
Russian Federation, Moscow

P. E. Trakhtman

The Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of the Russian Federation; Russian Medical Academy of Continuous Professional Education of Ministry of Healthcare of the Russian Federation

Email: anastasiya.ignatova@dgoi.ru
ORCID iD: 0000-0002-0231-1617
Russian Federation, Moscow; Moscow

References

  1. Gammon R.R., Hebert J., Min K., O'Connor J.J., 2nd, Ipe T., Razatos A. et al. Cold stored platelets – increasing understanding and acceptance. Transfus Apher Sci 2023;62:103639.
  2. Ketter P.M., Kamucheka R., Arulanandam B., Akers K., Cap A.P. Platelet enhancement of bacterial growth during room temperature storage: mitigation through refrigeration. Transfusion 2019;59:1479–89.
  3. Johnson L., Tan S., Wood B., Davis A., Marks D.C. Refrigeration and cryopreservation of platelets differentially affect platelet metabolism and function: a comparison with conventional platelet storage conditions. Transfusion 2016;56:1807–18.
  4. Reddoch-Cardenas K.M., Sharma U., Salgado C.L., Montgomery R.K., Cantu C., Cingoz N. et al. An in vitro pilot study of apheresis platelets collected on trima accel system and stored in T-PAS+ solution at refrigeration temperature (1–6°C). Transfusion 2019;59:1789–98.
  5. Mack J.P., Miles J., Stolla M. Cold-stored platelets: review of studies in humans. Transfus Med Rev 2020;34:221–6.
  6. Rumjantseva V., Hoffmeister K.M. Novel and unexpected clearance mechanisms for cold platelets. Transfus Apher Sci 2010;42:63–70.
  7. Van der Wal D.E., Du V.X., Lo K.S., Rasmussen J.T., Verhoef S., Akkerman J.W. Platelet apoptosis by cold-induced glycoprotein ibalpha clustering. J Thromb Haemost 2010;8:2554–62.
  8. Josefsson E.C., Gebhard H.H., Stossel T.P., Hartwig J.H., Hoffmeister K.M. The macrophage alphambeta2 integrin alpham lectin domain mediates the phagocytosis of chilled platelets. J Biol Chem 2005;280:18025–32.
  9. Getz T.M., Montgomery R.K., Bynum J.A., Aden J.K., Pidcoke H.F., Cap A.P. Storage of platelets at 4°C in platelet additive solutions prevents aggregate formation and preserves platelet functional responses. Transfusion 2016;56:1320–8.
  10. Slichter S.J., Fitzpatrick L., Osborne B., Christoffel T., Gettinger I., Pellham E. et al. Platelets stored in whole blood at 4°C: in vivo posttransfusion platelet recoveries and survivals and in vitro hemostatic function. Transfusion 2019;59: 2084–92.
  11. Neal M.D., Okonkwo D.O., Guyette F.X., Luther J.F., Vincent L.E., Puccio A.M. et al. Early cold-stored platelet transfusion following traumatic brain injury. Ann Surg 2025;281:796–805.
  12. Strandenes G., Sivertsen J., Bjerkvig C.K., Fosse T.K., Cap A.P., Del Junco D.J. et al. A pilot trial of platelets stored cold versus at room temperature for complex cardiothoracic surgery. Anesthesiology 2020;133:1173–83.
  13. Johnson L., Vekariya S., Wood B., Tan S., Roan C., Marks D.C. Refrigeration of apheresis platelets in platelet additive solution (PAS-E) supports in vitro platelet quality to maximize the shelf-life. Transfusion 2021;61 Suppl 1: S58–67.
  14. Marini I., Aurich K., Jouni R., Nowak-Harnau S., Hartwich O., Greinacher A et al. Cold storage of platelets in additive solution: The impact of residual plasma in apheresis platelet concentrates. Haematologica 2019;104:207–14.
  15. Stolla M., Fitzpatrick L., Gettinger I., Bailey S.L., Pellham E., Christoffel T. et al. In vivo viability of extended 4°C‐stored autologous apheresis platelets. Transfusion 2018;58:2407–13.
  16. Svidelskaya G.S., Sorkina V.P., Ignatova A.A., Ponomarenko E.A., Poletaev A.V., Seregina E.A. et al. Assay variables and early clinical evaluation of low-angle light scattering for platelet function analysis. Int J Hematol 2024;120:717–24.
  17. Mindukshev I., Gambaryan S., Kehrer L., Schuetz C., Kobsar A., Rukoyatkina N. et al. Low angle light scattering analysis: a novel quantitative method for functional characterization of human and murine platelet receptors. Clin Chem Lab Med 2012;50:1253–62.
  18. Zucker M.B., Borrelli J. Reversible alterations in platelet morphology produced by anticoagulants and by cold. Blood 1954;9:602–8.
  19. Johnson L., Cameron M., Waters L., Padula M.P., Marks D.C. The impact of refrigerated storage of UVC pathogen inactivated platelet concentrates on in vitro platelet quality parameters. Vox Sang 2019;114: 47–56.
  20. Johnson L., Roan C., Lei P., Spinella P.C., Marks D.C. The role of sodium citrate during extended cold storage of platelets in platelet additive solutions. Transfusion 2023;63 Suppl 3:S126–37.
  21. Mahajan J., Padula M.P., Marks D.C., Johnson L. Clot formation and resolution properties of platelets during cold storage for 21 days. Transfusion 2025;65:1307–18.

Supplementary files

Supplementary Files
Action
1. JATS XML
Download
2. Figure 1. Platelet morphological parameters on Days 1 and 5 of storage: А – platelet count; Б – mean platelet volume (MPV); В – platelet distribution width (PDW). * – significant differences between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05. RSPs – room temperature-stored platelets (at 20–24°C); CSPs – cold-stored platelets (at 2–6°C)

Download (113KB)
Indexing metadata
3. Figure 2. Spontaneous activation of RSPs and CSPs measured by flow cytometry using the CD62P-APC antibody to P-selectin (А), and annexin-V-GFP (Б). * – a significant difference between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05; § – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for RSPs, p < 0.05; # – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for CSPs, p < 0.05

Download (78KB)
Indexing metadata
4. Figure 3. Changes in the functional parameters of RSPs and CSPs: А – P-selectin expression in platelets activated by human collagen type I; Б – P-selectin expression in platelets activated by human collagen type I after the subtraction of spontaneous activation; В – the amplitude of collagen-induced platelet aggregation measured with the LaSca analyzer. * – a significant difference between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05; § – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for RSPs, p < 0.05; # – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for CSPs, p < 0.05

Download (141KB)
Indexing metadata
5. Figure 4. RSP and CSP desialylation. The mean fluorescence intensity of lectins bound to platelets: А – FITC–labeled SNA; Б – AF647-labeled MAL II; В – AF647-labeled RCA I. * – a significant difference between RSPs and CSPs within 1 day of storage, p < 0.05; § – a significant difference between Days 1 and 5 of storage for RSPs, p < 0.05

Download (119KB)
Indexing metadata

Copyright (c) 2026 «D. Rogachev NMRCPHOI»

Creative Commons License
This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.