Pediatric Hematology/Oncology and ImmunopathologyPediatric Hematology/Oncology and ImmunopathologyВопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии1726-17082414-9314Fund Doctors, Innovations, Science for Children101910.24287/1726-1708-2025-24-2-104-110PWYNRGORIGINAL ARTICLESОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИResearch ArticleDetection of phosphatidylserine-expressing red blood cells in whole bloodДетекция фосфатидилсерин-экспрессирующих эритроцитов в цельной кровиhttps://orcid.org/0000-0003-0625-1743ChabinIvan A.ЧабинИван Андреевич
Russian Federation
ivan.chabin@dgoi.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8013-1112PodoplelovaN. A.ПодоплеловаНадежда Александровна
Russian Federation
podoplelovan@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0003-0167-6726KoltsovaEkaterina M.КольцоваЕкатерина Михайловна
Russian Federation
ekaterina_koltsova@bk.ruhttps://orcid.org/0000-0002-4664-6953ButovKirill R.БутовКирилл Романович
Russian Federation
no-reply@eco-vector.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2930-8768ObydennyiSergei I.ОбыденныйСергей Иванович
Russian Federation
obydennyj@physics.msu.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2756-7325SmetaninaNataliya S.СметанинаНаталия Сергеевна
Russian Federation

MD, Dr. Sci. (Medicine), Professor

д-р мед. наук, профессор

Nataliya.Smetanina@dgoi.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8128-7757PanteleevMikhail A.ПантелеевМихаил Александрович
Russian Federation

Corresponding Member of the RAS, Dr. Sci. (Physics and Mathematics), Professor

член-корр. РАН, д-р физ.-мат. наук, профессор

mapanteleev@yandex.ruDmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and ImmunologyФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева» Минздрава РоссииCenter for Theoretical Problems of Physical and Chemical Pharmacology, Russian Academy of SciencesФГБУН «Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии» РАНPirogov Russian National Research Medical UniversityФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава РоссииLomonosov Moscow State University, MoscowФГБОУ ВО «Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова»08092025300620252421041100809202508092025Copyright ©; 2025, «D. Rogachev NMRCPHOI»Copyright ©; 2025, ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России2025«D. Rogachev NMRCPHOI»ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава Россииhttps://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://hemoncim.com/jour/article/view/1019

There are various mechanisms of red blood cell (RBC) clearance from the circulation, including eryptosis and hemolysis. The spleen plays a major role in eliminating RBCs from the blood flow thanks to their ability to pass through narrow spaces. Still, some questions such as the role of phosphatidylserine-binding proteins in this process remain unanswered. Thus, RBC elimination mechanisms are still not very well explored. Here, we report on a flow cytometry protocol using phosphatidylserine markers for the detection of whole blood erythrocytes that can be classified as pre-elimination RBCs. We also provide the results of healthy donors' blood testing suggesting that reliable detection of eryptosis in whole blood is indeed possible. The study was approved by the Independent Ethics Committee and the Scientific Council of the Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology of Ministry of Healthcare of Russia.

Механизмы клиренса эритроцитов из кровотока разнообразны и могут включать такие процессы, как эриптоз и гемолиз. При этом несомненна роль селезенки, которая удаляет эритроциты из кровотока в связи с их способностью проходить сквозь узкие пространства, однако отдельные аспекты, такие как роль белков в этом процессе, которые могут связывать фосфатидилсерин, продолжают вызывать вопросы. Таким образом, точные механизмы элиминации эритроцитов до сих пор не установлены. В данной работе приведен цитофлуориметрический протокол детекции эритроцитов цельной крови, которые могут быть отнесены к предэлиминационной стадии, с использованием маркеров фосфатидилсерина. Также представлены результаты анализа крови здоровых доноров, которые позволяют говорить о возможности надежной детекции эриптоза в цельной крови. Настоящее исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России.

red blood cellscell deatheryptosisflow cytometryэритроцитыклеточная смертьэриптозпроточная цитофлуориметрияРоссийский научный фондRussian Science Foundation23-75-10120Ataullakhanov F.I., Borsakova D.V., Protasov E.S., Sin- auridze E.I., Zeynalov A.M. Erythro¬cyte: а bag with hemoglobin, or a living active cell? Pediatric Hematology/Oncology and Immunopathology 2018; 17 (1): 108-16. (In Russ.)Атауллаханов Ф.И., Борсакова Д.В., Протасов Е.С., Синауридзе Е.И., Зейналов А.М. Эритроцит: мешок с гемоглобином или живая, активная клетка? Вопросы гематологии/ онкологии и иммунопатологии в педиатрии 2018; 17 (1): 108-16. DOI: 10.24287/1726-1708-201817-1-108-116Piety N.Z., Reinhart W.H., Pourreau P.H., Abidi R., Shevkoplyas S.S. Shape matters: the effect of red blood cell shape on perfusion of an artificial microvascular network. Transfusion 2016; 56 (4): 844-51.Franco R.S., Estela Puchulu-Campanella M., Barber L.A., Palascak M.B., Joiner C.H., Low P.S., Cohen R.M. Changes in the proper¬ties of normal human red blood cells during in vivo aging. Am J Hematol 2013; 88 (1): 44-51.Franco R.S., Estela Puchulu-Campanella M., Barber L.A., Palascak M.B., Joiner C.H., Low P.S., Cohen R.M. Changes in the properties of normal human red blood cells during in vivo aging. Am J Hematol 2013; 88 (1): 44-51.Fens M.H.A.M., Mastrobattista E., de Graaff A.M., Flesch F.M., Ultee A., Rasmussen J.T., et al. Angiogenic endothelium shows lactadherindependent phagocytosis of aged erythrocytes and apoptotic cells. Blood 2008; 111 (9): 4542-50.Lee S.J., Park S.-Y., Jung M.-Y., Mun Bae S., Kim I.-S. Mechanism for phosphatidylserine-dependent erythrophagocytosis in mouse liver. Blood 2011; 117 (19): 5215-23.Zahedpanah M., Azarkeivan A., Aghaieepour M., Nikogoftar M., Ahmadinegad M., Hajibeigi B., et al. Erythrocytic phosphatidylserine exposure and hemostatic alterations in p-thalassemia intermediate patients. Hematology 2014; 19 (8): 472-6.Alamin A.A. The Role of Red Blood Cells in Hemostasis. Semin Thromb Hemost 2021; 47 (1): 26-31.Weisel J.W., Litvinov R.I. Red blood cells: the forgotten player in hemostasis and thrombosis. J Thromb Haemost 2019; 17 (2): 271-82.Byrnes J.R., Wolberg A.S. Red blood cells in thrombosis. Blood 2017; 130 (16): 1795-9.Lang K.S., Lang P.A., Bauer C., Duranton C., Wieder T., Huber S.M., Lang F. Mechanisms of suicidal erythrocyte death. Cell Physiol Biochem 2005; 15 (5): 195-202.Leal J.K.F., Adjobo-Hermans M.J.W., Bosman G.J.C.G.M. Red blood cell homeostasis: Mechanisms and effects of microvesicle generation in health and disease. Front Physiol 2018; 9: 703.Morel O., Jesel L., Freyssinet J.-M., Toti F. Cellular mechanisms underlying the formation of circulating microparticles. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2011; 31 (1): 15-26.Koltsova E., Avilova A., Nikolaeva E., Kolchin N., Butov K. Engineered fluorescent variants of lactadherin C2 Domain for phosphatidylserine detection in flow cytometry. Biomolecules 2025; 15: 673.Nguyen D.B., Wagner-Britz L., Maia S., Steffen P., Wagner C., Kaestner L., Bernhardt I. Regulation of phosphatidylserine exposure in red blood cells. Cell Physiol Biochem 2011; 28 (5): 847-56.Shi J., Shi Y., Waehrens L.N., Rasmussen J.T., Heegaard C.W., Gilbert G.E. Lactadherin detects early phos- phatidylserine exposure on immortalized leukemia cells undergoing programmed cell death. Cytometry A 2006; 69 (12): 1193-201.Shi J., Shi Y., Waehrens L.N., Rasmussen J.T., Heegaard C.W., Gilbert G.E. Lactadherin detects early phos-phatidylserine exposure on immortalized leukemia cells undergoing programmed cell death. Cytometry A 2006; 69 (12): 1193-201.Jemaa M., Fezai M., Bissinger R., Lang F. Methods employed in cyto- fluorometric assessment of eryptosis, the suicidal erythrocyte death. Cell Physiol Biochem 2017; 43 (2): 431-44.Jemaa M., Fezai M., Bissinger R., Lang F. Methods employed in cyto-fluorometric assessment of eryptosis, the suicidal erythrocyte death. Cell Physiol Biochem 2017; 43 (2): 431-44.Sutherland D.R., Keeney M., Illingworth A. Practical guidelines for the high-sensitivity detection and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria clones by flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom 2012; 82B (4): 195-208.