Introduction. Essential thrombocythemia (ET) and polycythemia vera (PV) are Philadelphia chromosome-negative chronic myeloproliferative neoplasms characterized by increased megakaryocyte proliferation. Although megakaryocyte morphometry in bone marrow biopsy samples has been well studied, their morphology and distribution by maturation stages remain insufficiently investigated.
The aim of our work is to study the distribution of megakaryocytes from the patients with ET and PV by maturation stages, as well as their ability to form podosomes upon contact with extracellular matrix proteins.
Materials and methods. We isolated megakaryocytes from 12 patients with ET, 4 patients with PV, and 25 healthy donors using a transparent slide with immobilized monafram – the F(ab′)2 fragment of a mouse monoclonal antibody to glycoprotein IIb–IIIa. Their morphology, distribution by maturation stages, and size were analyzed. In 3 healthy donors and 3 patients with ET, we analyzed the density of podosomes formed during incubation with monafram, collagen I, and fibrinogen using fluorescent confocal microscopy (staining with fluorescently labeled phalloidin).
Results. Compared with the healthy donors, the patients with ET and PV had a significantly higher proportion of mature megakaryocytes, but a lower proportion of megakaryocytes at the second stage of maturation. Megakaryocyte size in the patients with chronic myeloproliferative neoplasms was also significantly greater than in the healthy donors: in the ET patients – starting from the second stage of maturation, and in the PV patients – starting from the third stage of maturation. The density of podosomes per unit area formed by megakaryocytes on slides with immobilized monafram, collagen I, and fibrinogen in the ET patients did not differ from that in the healthy donors. Podosome density on fibrinogen exceeded that on collagen I, which is consistent with the literature data.
Conclusion. Among megakaryocytes isolated from the bone marrow aspirates of the patients with ET and PV, mature forms predominate; these cells are larger than normal megakaryocytes and often have multilobulated nuclei. The actin cytoskeleton in the ET patients is not disrupted and upon cell contact with extracellular matrix proteins, forms podosomes that are similar in structure and number to those of megakaryocytes from the healthy donors.
Введение. Эссенциальная тромбоцитемия (ЭТ) и истинная полицитемия (ИП) – Ph-негативные хронические миелопролиферативные новообразования, характеризующиеся усиленной пролиферацией мегакариоцитов. Хотя морфометрия мегакариоцитов в биоптатах костного мозга хорошо изучена, их морфология и распределение по стадиям созревания исследованы недостаточно.
Цель работы – исследование распределения мегакариоцитов пациентов с ЭТ и ИП по стадиям созревания, а также их способности образовывать подосомы при контакте с белками внеклеточного матрикса.
Материалы и методы. У 12 пациентов с ЭТ, 4 – с ИП и 25 здоровых доноров с помощью прозрачной подложки с иммобилизованным монафрамом – F(ab′)2-фрагментом мышиного моноклонального антитела к гликопротеину IIb–IIIa – были выделены мегакариоциты и исследованы их морфология, распределение по стадиям созревания и размеры. Для 3 здоровых доноров и 3 пациентов с ЭТ методом флуореcцентной конфокальной микроскопии была также исследована плотность подосом, образующихся при инкубации с монафрамом, коллагеном I и фибриногеном с помощью окраски флуоресцентно меченым фаллоидином.
Результаты. У пациентов с ЭП и ИТ доля зрелых мегакариоцитов была значимо выше, а доля мегакариоцитов на 2-й стадии созревания – ниже, чем у здоровых доноров. Размеры мегакариоцитов у пациентов с хроническими миелопролиферативными новообразованиями также были значимо больше, чем у здоровых доноров: у пациентов с ЭТ – начиная со 2-й стадии созревания, а у пациентов с ИП – с 3-й стадии. Плотность подосом на единицу площади клетки, образуемых мегакариоцитами на подложках с иммобилизованными монафрамом, коллагеном I и фибриногеном у пациентов с ЭТ, не отличалась от здоровых доноров, а плотность подосом на фибриногене превышала их плотность на коллагене I, что соответствует литературным данным.
Заключение. Среди мегакариоцитов, выделенных из пунктатов костного мозга пациентов с ЭТ и ИП, преобладают зрелые формы, превышающие по размерам нормальные мегакариоциты, часто с многодольчатыми ядрами. Актиновый цитоскелет у пациентов с ЭТ не нарушен и образует подосомы при контакте клетки с белками внеклеточного матрикса, совпадающие по структуре и количеству с подосомами мегакариоцитов здоровых доноров.