Pediatric Hematology/Oncology and ImmunopathologyPediatric Hematology/Oncology and ImmunopathologyВопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии1726-17082414-9314Fund Doctors, Innovations, Science for Children16410.24287/1726-1708-2016-15-3-12-18HEMATOLOGYГЕМАТОЛОГИЯFLAER-negative granulocytes detection in periferal blood is simple and highly reproducible test for pnh screeningОпределение FLAER-негативных гранулоцитов в периферической крови -простой скрининг-тест для диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурииPopovAlexander M.ПоповАлександр Михайлович
Russian Federation
uralcytometry@gmail.comKashporSvetlana A.КашпорСветлана Александровна
Russian Federation
cldimmynol.fgu@mail.ruVerzhbitskayaTatiana Yu.ВержбицкаяТатьяна Юрьевна
Russian Federation
uralverba@gmail.comBorisovVyacheslav V.БорисовВячеслав Игоревич
Russian Federation
borisovv@alxn.comFechinaLarisa G.ФечинаЛариса Геннадьевна
Russian Federation
childrens_oncology@mail.ruPlyasunovaSvetlana A.ПлясуноваСветлана Александровна
Russian Federation
svetlana.plyasunova@fccho-moscow.ruMaschanAlexey A.МасчанАлексей Александрович
Russian Federation
info@fnkc.ruNovichkovaGalina A.НовичковаГалина Анатольевна
Russian Federation
info@fnkc.ruFederal Research Center for Pediatric Hematology, Oncology and ImmunologyФедеральный научно-клинический центр детской гематологии, онкологии и иммунологии им. Дмитрия Рогачева Минздрава РоссииPediatric Oncology/Hematology Center, Regional Children Hospital, EkaterinburgОбластная детская клиническая больница №1, ЕкатеринбургAlexion PharmaООО «Алексион Фарма»Federal Research Center for Pediatric Hematology, Oncology and ImmunologyИнститут гематологии, иммунологии и клеточных технологий19092016153121819092018Copyright ©; 2016, «D. Rogachev NMRCPHOI»Copyright ©; 2016, ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России2016«D. Rogachev NMRCPHOI»ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава Россииhttps://creativecommons.org/licenses/by/4.0https://hemoncim.com/jour/article/view/164

GPI-deficient cells' detection by multicolor flow cytometry using fluorescently labeled aerolysin (FLAER) currently is a standard approach for PNH diagnostics. Nevertheless more simple and cheap approach with high sensitivity is needed for routine PNH screening. The aim of present study was to investigate the applicability of simplified two-color (FLAER/CD15) flow cytometry for PNH clone screening. Search for FLAER-negative granulocytes was performed in 259 peripheral blood samples obtained from the patients with suspected PNH. Symplified analysis results were compared to the multicolor data. Both in test cohort (n = 216) and validation cohort (n = 43) FLAER-negative granulocytes detection results correlated well with conventional cytometric test findings. Simplified approach diagnostic sensitivity achieved 100% while rate of false positive results was very low (2.63% in test cohort and 0% in validation cohort). Thus two-color detection of FLAER-negative I granulocytes is effective test as a screening for presence of PNH clone. Nevertheless the positive result of screening investigation should be always confirmed by multicolor assessment of PNH clone size among erythrocytes, granulocytes and monocytes.

пароксизмальная ночная гемоглобинурияпроточная цитометрияFLAERparoxysmal nocturnal hemoglobinuriaflow cytometryFLAERParker CJ. The pathophysiology of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Exp Hemtol. 2007;35(4):523-33.Richards SJ, Hill A, Hillmen P. Recent advances in the diagnosis, monitoring, and management of patients with paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72(5):291-8.Кулагин АД, Лисуков ИА, Птушкин ВВ, Шилова ЕР, Цветаева НВ, Михайлова ЕА. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Онкогематология. 2014;2:20-8.Новичкова ГА, Петрова УН, Калинина ИИ, Масчан АА. Пароксизмальная ночная гемоглобинурия у детей (обзор литературы). Доктор.ру. 2016; 5(122):15-20.Brodsky RA, Mukhina GL, Li S, Nelson KL, Chiurazzi PL, Buckley JT, et al. Improved detection and characterization of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria using fluorescent aerolysin. Am J Clin Pathol. 2000;114(3):459-66.Peghini PE, Fehr J. Clinical evaluation of an aerolysin-based screening test for paroxysmal nocturnal haemoglobinuria. Cytometry B Clin Cytom. 2005; 67(1):13-8.Sutherland DR, Kuek N, Davidson J, Barth D, Chang H, Yeo E, et al. Diagnosing PNH with FLAER and multiparameter flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 2007;72(3):167-77.Sutherland DR, Kuek N, Azcona-Olivera J, Anderson T, Acton E, Barth D, et al. Use of a FLAER-based WBC assay in the primary screening of PNH clones. Am J Clin Pathol. 2009;132(4):564-72.Borowitz MJ, Craig FE, Digiuseppe JA, Illingworth AJ, Rosse W, Sutherland DR, et al. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by flow cytometry. Cytometry B Clin Cytom. 2010;78(4):211-30.Sutherland DR, Illingworth A, Keeney M, Richards SJ. High-Sensitivity Detection of PNH Red Blood Cells, Red Cell Precursors, and White Blood Cells. Curr Protoc Cytom. 2015;72(6):1-29.Плеханова ОС, Наумова ЕВ, Луговская СА, Почтарь МЕ, Бугров ИЮ, Долгов ВВ. Методологические подходы к диагностике пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Клиническая лабораторная диагностика. 2016;61(3):151-68.Sutherland DR, Acton E, Keeney M, Davis BH, Illingworth A. Use of CD157 in FLAER-based assays for high-sensitivity PNH granulocyte and PNH monocyte detection. Cytometry B Clin Cytom. 2014;86(1):44-55.Гальцева ИВ, Фидарова ЗТ, Борисов ВИ, Михайлова ЕА. Новые возможности диагностики клона пароксизмальной ночной гемоглобинурии. Гематология и трансфузиология. 2015;60(2):6-9.Hochsmann B, Rojewski M, Schrezenmeier H. Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH): higher sensitivity and validity in diagnosis and serial monitoring by flow cytometric analysis of reticulocytes. Ann Hematol. 2011;90(8): 887-99.Наумова ЕВ, Плеханова ОС, Луговская СА, Почтарь МЕ, Бугров ИЮ. Оценка и сравнительная характеристика определения ПНГ-клона на ретикулоцитах методом проточной цитометрии. Клиническая лабораторная диагностика. 2014;59(7):25-40.Наумова ЕВ, Почтарь МЕ, Кисиличина ДГ, Плеханова ОС, Сипол АА, Бабенко ЕВ и др. Стандартизация диагностики пароксизмальной ночной гемоглобинурии с помощью проточной цитометрии. Клиническая лабораторная диагностика. 2013;61(7):54-8.Sipol AA, Babenko EV, Borisov VI, Naumova EV, Boyakova EV, Yakunin DI, et al. An inter-laboratory comparison of PNH clone detection by high-sensitivity flow cytometry in a Russian cohort. Hematology. 2015;20(1):31-8.Weinstein S, Obuchowski NA, Lieber ML. Clinical evaluation of diagnostic tests. Am J Roentgenol. 2005;184(1):14-9.