The differential diagnosis of hereditary spherocytosis is a great challenge because of the similar clinical and laboratory signs it shares with other hereditary hemolytic anemias as well as due to the limited availability of molecular genetic testing. The development of easy-to-perform laboratory tests for the differential diagnosis of hereditary hemolytic anemias remains as relevant as ever. Here, a method of measuring red blood cell filterability for the diagnosis of hereditary spherocytosis is proposed for the first time. The aim of our study was to compare red blood cell filterability measurement with other diagnostic tests for hereditary spherocytosis as well as to assess its specificity and sensitivity. We included 30 patients (18 girls and 12 boys, with the median age of 8.6 years) with hereditary spherocytosis and 15 patients (9 girls and 6 boys, with the median age of 10 years) with other hereditary hemolytic anemias (pyruvate kinase deficiency (n = 14) and stomatocytosis (n = 1)). The diagnostic work-up for hereditary hemolytic anemia included a complete blood count test using an automated hematology analyzer, an osmotic resistance analysis before and after 24 hours of incubation at 37°С, erythrocytometry with sphericity index calculation, EMA test (eosin-5-maleimide binding assay) and red blood cell filterability measurement using artificial filters with cylindrical pores 3-5 μm in diameter. The study was approved by the Independent Ethics Committee and the Scientific Council of the Dmitry Rogachev National Medical Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology. The parents of all of the enrolled children signed a voluntary informed consent form for peripheral blood collection and diagnostic testing. In all the cases of hereditary spherocytosis diagnosed in accordance with the relevant clinical recommendations, red blood cell filterability was very low (0–0.31 units). It was higher only in 3 instances, reaching 0.47, 0.64 and 0.82 units, but in two of these cases there were no genetic data available, and the remaining patient was found to harbor the SPTA1 c.433999C>T mutation which was characterized both as spherocytosis and elliptocytosis. Red blood cell filterability in the group of the patients with other hemolytic anemias equalled 0.55 to 0.86 units (with the median of 0.77 units). The sensitivity of the RBC filterability measurement method in diagnosing hereditary spherocytosis was 93% (with 100% specificity), while the EMA test had a sensitivity of 89% and specificity of 95%. Our comparative study showed that red blood cell filterability measurement and the EMA test have similar sensitivity and specificity in diagnosing hereditary spherocytosis but the former is much cheaper and easier to perform since it does not require expensive equipment and can be carried out at any laboratory.
Дифференциальная диагностика наследственного сфероцитоза является сложной задачей изза схожести клинических и лабораторных проявлений у пациентов с данным заболеванием и другими формами наследственных гемолитических анемий, а также из-за малой доступности молекулярно-генетических исследований. Разработка легко выполнимых лабораторных исследований для дифференциальной диагностики наследственных гемолитических анемий остается актуальной. В настоящей работе впервые предложено использовать для диагностики наследственного сфероцитоза метод измерения фильтруемости эритроцитов. Цель исследования: сравнить метод фильтруемости эритроцитов с другими методами диагностики наследственного сфероцитоза и оценить его специфичность и чувствительность. В исследование включены 30 пациентов (18 девочек и 12 мальчиков, средний возраст 8,6 года) с наследственным сфероцитозом и 15 пациентов (9 девочек и 6 мальчиков, средний возраст 10 лет) с другими наследственными гемолитическими анемиями (дефицит пируваткиназы (n = 14) и стоматоцитоз (n = 1)). Для диагностики наследственной гемолитической анемии пациентам выполнялись исследование общего анализа крови на автоматическом гематологическом анализаторе, осмотической резистентности до и после 24 ч инкубации при 37°С, эритроцитометрия с расчетом индекса сферичности, ЭМА-тест (связывание эозин-5-малеимида) и измерение фильтруемости эритроцитов через искусственные фильтры с цилиндрическими порами диаметром 3–5 мкм. Настоящее исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева. Родители всех пациентов, включенных в исследование, подписали добровольное информированное согласие на забор крови из периферической вены и проведение диагностических исследований. Фильтруемость эритроцитов для всех случаев диагностированного в соответствии с действующими клиническими рекомендациями наследственного сфероцитоза очень низкая (0–0,31 ед.). Она была выше только в 3 случаях и составила 0,47, 0,64 и 0,82 ед., но в 2 из них отсутствовали данные генетики, а еще в 1 случае была обнаружена мутация SPTA1 c.433999C>T, которая ранее была охарактеризована не только как наследственный сфероцитоз, но и как эллиптоцитоз. Фильтруемость эритроцитов в группе других гемолитических анемий составила от 0,55 до 0,86 ед. (медиана 0,77 ед.). Чувствительность метода фильтруемости по отношению к наследственному сфероцитозу составила 93% (при специфичности 100%), тогда как для ЭМА-теста – 89% (при специфичности 95%). Проведенные сравнительные исследования показали, что при диагностике наследственного сфероцитоза измерение фильтруемости эритроцитов не уступает ЭМА-тесту по чувствительности и специфичности, однако это исследование гораздо менее трудоемко и затратно, поскольку не требует дорогого оборудования и может быть легко проведено в любой лаборатории.