Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии

Разработка методов клеточной терапии Т-линейного острого лимфобластного лейкоза является актуальной задачей. В настоящем исследовании представлен доклинический этап разработки анти-CD5 CAR-T-лимфоцитов в условиях отсутствия дополнительных генетических модификаций за счет естественной down-регуляции маркера CD5. Полученные клеточные продукты продемонстрировали удовлетворительные показатели кратности экспансии и доли CAR-экспрессирующих клеток, преобладание Tem-фенотипа (CD197–CD45RA–), низкие уровни экспрессии маркеров истощения (PD-1, CD57, TIGIT). Функциональная активность была продемонстрирована как in vitro посредством оценки дегрануляции, синтеза цитокинов и цитотоксичности в отношении клеточной линии Jurkat, так и in vivo посредством исследования элиминации CD5+-лейкоза на мышиной модели. Полученные данные могут быть использованы для формирования клинического протокола производства анти-CD5 CAR-T-лимфоцитов. Исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева.

Высокодозный посттрансплантационный циклофосфамид (ПТЦф) является признанным методом профилактики реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ) при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) от гаплоидентичных доноров, однако данные о его эффективности в педиатрической популяции остаются ограниченными. В рамках проспективного исследования нами была оценена усовершенствованная схема профилактики РТПХ на основе ПТЦф, включающая блокатор интегрина a4p7 ведолизумаб и ингибитор ко-стимулирующего сигнала абатацепт в дополнение к стандартной терапии ПТЦф и циклоспорином A. Исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева. Аллогенная ТГСК проводилась детям с острым лейкозом высокого риска в стадии полной ремиссии от гаплоидентичного (n = 54) либо неродственного (n = 4) донора. Миелоаблативное кондиционирование было основано на треосульфане либо тотальном облучении тела. В 97% случаев в качестве источника трансплантата использовался костный мозг. Частота приживления трансплантата составила 98%. Кумулятивный риск развития острой РТПХ II-IV и III-IV стадии составил 38% и 8,6% соответственно, кишечной острой РТПХ II-IV стадии - 10%, хронической РТПХ - 7%. Трансплантат-ассоциированная смертность через 2 года наблюдения составила 3,6%, частота рецидивов - 16%, общая выживаемость - 91%, а бессобытийная выживаемость - 85%. В целом предложенная схема профилактики РТПХ продемонстрировала благоприятный профиль безопасности и хорошую переносимость без выявления специфических нежелательных явлений.

Несмотря на высокую эффективность трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) у детей с приобретенной апластической анемией (ПАА), недостаточность и отторжение трансплантата остаются одной из основных проблем. Факторами риска отторжения и гипофункции трансплантата, персистенции смешанного химеризма являются аллосенсибилизация, недостаточные количественные характеристики трансплантата, относительно сохранный собственный миелопоэз. Обеспечения долгосрочного приживления трансплантата возможно достичь путем модификации режима кондиционирования и иммуносупрессивной профилактики. Одной из перспективных опций является включение мелфалана в схему кондиционирования. Проведен ретроспективный анализ результатов ТГСК с использованием мелфалансодержащих режимов кондиционирования у 21 ребенка с ПАА (18 первичных, 3 повторных ТГСК): 11 от полностью совместимых неродственных доноров, 9 совместимых родственных, 1 гаплоидентичного. Основанный на ингибиторах кальциневрина режим профилактики реакции «трансплантат против хозяина» получили 9 детей, на ингибиторах янус-киназ - 12. Удовлетворительная функция трансплантата достигнута у всех детей при отсутствии тяжелых осложнений. По данным итоговых результатов у 95% пациентов определен общий полный донорский химеризм, по CD3⁺-линии 85,7% с долей собственных клеток (СК) 9-13%. Включение мелфалана в режим кондиционирования у пациентов с ПАА перед ТГСК в сочетании с новыми менее токсичными схемами профилактики реакции «трансплантат против хозяина» может стать эффективной опцией преодоления риска отторжения трансплантата при низком уровне токсичности и частоты развития осложнений. Исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета ФГАОУ ВО «Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова» Минздрава России.

Широкое применение препаратов крови неизбежно ведет к увеличению числа осложнений, связанных с ним. Одним из редких и трудноконтролируемых осложнений являются тромбоэмболические события. В настоящее время механизмы и возможные лабораторные предикторы таких осложнений неясны. В данной работе представлен опыт применения проточной цитофлуориметрии для оценки параметров экспрессии фосфатидилсерина (детектируемой по связыванию аннексина V) и описаны нарушения деформируемости эритроцита (детектируемого по данным прямого и бокового светорассеяния), которые обусловливают прокоагулянтные свойства клеток. Полученные результаты демонстрируют спорную возможность применения аннексина V для оценки процесса постепенной гибели клеток в образцах эритроцитной взвеси, одновременно показывая большую чувствительность оценки накопления эритроцитов измененной формы для детекции программируемой клеточной гибели - эриптоза. Результаты данной работы могут быть использованы для улучшения детекции погибших эритроцитов в рутинной практике хранения эритроцитной взвеси. Настоящее исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России.

В-клеточные предшественники (гематогоны) составляют менее 5% нормальных ядросодержащих клеток костного мозга (КМ), но при некоторых клинических состояниях их процентное содержание может увеличиваться. Морфология гематогонов была охарактеризована у пациентов с их повышенным количеством. Однако малочисленность гематогонов и невозможность получения их чистой популяции затрудняют детальный морфологический анализ этих клеток в нормальном КМ. У 14 пациентов с повышенным содержанием гематогонов и 12 здоровых доноров с помощью биочипов с иммобилизованными антителами к антигенам кластеров дифференцировки (CD) была выделена чистая популяция гематогонов как CD10⁺-фракция мононуклеарных клеток КМ. Были описаны основные морфологические подтипы гематогонов здорового КМ и проанализирована доля этих клеток среди CD19+-, CD22+-, CD20+- и CD10⁺CD34⁺-мононуклеаров КМ. От 1 до 9% гематогонов имеют диаметр 13-17 мкм, базофильную цитоплазму, кружевную или мелкосетчатую бластную структуру хроматина и ярко выраженные ядрышки. Остальные гематогоны представляют собой незрелые лимфоидные клетки с широким распределением по размерам (7-15 мкм в диаметре), скудной цитоплазмой, «смазанным» хроматином и отсутствием ядрышек. От 3 до 25% клеток в последней категории имеют размер более 10 мкм. Клетки CD10+CD34+ не имеют преимущественно бластной морфологии, в то время как некоторые бластоподобные гематогоны экспрессируют CD20. Гематогоны в нормальном КМ неоднородны по морфологии и размеру. Явной корреляции между морфологией гематогонов и их иммунологической стадией созревания обнаружено не было. Исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России. Было получено согласие доноров и пациентов на забор КМ и будущие биомедицинские исследования.

Механизмы клиренса эритроцитов из кровотока разнообразны и могут включать такие процессы, как эриптоз и гемолиз. При этом несомненна роль селезенки, которая удаляет эритроциты из кровотока в связи с их способностью проходить сквозь узкие пространства, однако отдельные аспекты, такие как роль белков в этом процессе, которые могут связывать фосфатидилсерин, продолжают вызывать вопросы. Таким образом, точные механизмы элиминации эритроцитов до сих пор не установлены. В данной работе приведен цитофлуориметрический протокол детекции эритроцитов цельной крови, которые могут быть отнесены к предэлиминационной стадии, с использованием маркеров фосфатидилсерина. Также представлены результаты анализа крови здоровых доноров, которые позволяют говорить о возможности надежной детекции эриптоза в цельной крови. Настоящее исследование одобрено независимым этическим комитетом и утверждено решением ученого совета ФГБУ «НМИЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России.

Гиперхолестеринемия является одним из осложнений аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. В ее этиологии могут играть роль различные факторы, в том числе реакция «трансплантат против хозяина» (РТПХ) с поражением печени. В статье представлен клинический случай тяжелой гиперхолестеринемии на фоне острой РТПХ с поражением печени у пациента с синдромом Ниймеген. Родители пациента дали согласие на использование информации, в том числе фотографий ребенка, в научных исследованиях и публикациях. При исследовании соотношения липидных фракций с помощью электрофореза периферической крови с их последующим типированием был верифицирован высокий уровень липопротеина Х. Данный лабораторный феномен является характерным проявлением при нарушении липидного обмена, ассоциированного с холестазом, сопровождающим печеночную форму РТПХ. Клиническое улучшение и снижение уровня холестерина достигнуто после интенсификации иммуносупрессивной терапии. Представленный клинический случай актуализирует необходимость своевременного выявления и дифференцированной оценки тяжелой гиперхолестеринемии у пациентов после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.

В статье представлено краткое описание случая метастатического поражения кожи St. maltophilia у ребенка с диагнозом первичный иммунодефицит на фоне глубокого агранулоцитоза, ассоциированного с отторжением аллогенного трансплантата гемопоэтических стволовых клеток.

Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) - это ключевой метод лечения жизнеугрожающих гематологических и иммунологических заболеваний. Иммунная реконституция после аллогенной ТГСК представляет собой сложный и многоэтапный процесс, который критически важен для восстановления иммунной функции пациента и снижения риска инфекционных осложнений. Исследования показывают, что у большинства пациентов наблюдается значительное улучшение иммунной функции через 6-12 мес после трансплантации, однако полное восстановление может занять 2 года или более. Одним из ключевых осложнений аллогенной ТГСК является пролонгированная гипогаммаглобулинемия - низкие уровни сывороточного иммуноглобулина G на сроках более 2 лет после аллогенной ТГСК. В отсутствие четкого порога, определяющего гипогаммаглобулинемию, общепринятым является уровень иммуноглобулина G в сыворотке крови ниже 5 г/л. Нарушение антителообразования и возникновение пролонгированной гипогаммаглобулинемии у детей после аллогенной ТГСК представляют собой сложные проблемы, требующие внимательного мониторинга и адекватного лечения. Своевременное восстановление как количества, так и функциональности В-клеток является критически важным для снижения риска инфекционных осложнений и улучшения качества жизни пациентов.

Анемия Даймонда-Блекфена - редкое заболевание из группы врожденных синдромов костномозговой недостаточности, характерной чертой которого является угнетение эритропоэза, обусловленное интенсивными процессами апоптоза эритроидных предшественников вследствие дефекта биосинтеза рибосом. Классические опции при терапии анемии Даймонда-Блекфена включают в себя длительное применение глюкокортикостероидов и трансфузии донорских эритроцитов, однако такие подходы в долгосрочной перспективе приводят к развитию отдаленных неблагоприятных событий, что стимулирует поиск альтернативных методов терапии. В данной работе рассмотрены современные представления об этиопатогенезе и терапии этого заболевания.